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抗原修复锅进行抗原热修复的方法分析

 发布时间:2019-06-04 点击量:594
   抗原修复锅进行抗原热修复的方法分析
  抗原修复锅修复方法的优点是暴露抗原决定簇的效果较好,结果稳定,受环境条件影响小(特别适合于高原地区),可重复性高,是一个理想的修复方法;但对于组织处理不佳的切片,容易脱片;同时用高pH值的抗原修复液会引起细胞核的碎裂和非特异性的增加,因此,尽量避免使用高pH值的抗原修复液(EDTA、EGTA),建议采用pH6.0的柠檬酸抗原修复液。
  利用抗原修复锅进行抗原热修复的技术,具体方法是:
  1、将盛有抗原修复液的修复锅在电磁炉上加热至沸腾。
  2、将脱蜡至蒸馏水的切片置入抗原修复液中加盖进行热处理,当气阀喷气后计时1.5-3分钟(喷气时间的差异主要是因为后面冷却的方法不同:喷气时间1.5-2分钟,采用自然冷却法,切片还浸在高温的液体内20多分钟,抗原在高温下继续修复,因此,可缩短喷气的时间;而快速冷却,抗原修复立即被中止,因此,喷气时间一般为3分钟)。
  3、自然冷却20分钟至缓冲液37℃以下时拿出切片(超过这个温度拿出,会导致切片由于高温干燥,造成阴阳脸);或将抗原修复锅置入冷水中降温,待高压锅放气后,打开锅盖,将自来水直接冲入锅内,使缓冲液温度降至45℃以下后,取出切片。
  4、洗3分钟进行后进行免疫组织化学染色。
  此外,要想做好抗原热修复,也要注意产品的质量。因此,选择抗原修复锅主要考虑以下两点:
  1.抗原的自然特性以及所选择的抗体
  抗原自身特性和抗原的位置都是首要考虑。我们建议你刚开始的时候选择抗原表达环境的修复锅。
  2.固定液以及固定程度
  建议的组织切片的抗原修复处理是一种针对普通的适化状态切片。如果用来切片的组织块没有充分固定,或者过固定(留在福尔马林溶液中时间过长),或者用了其它的固定液,那么,处理组织切片的流程方案需要重新修订,便利的办法是选择使用G系列缓冲液。对于过固定的材料一般推荐用抗原修复锅或者在同一修复锅里面增加循环。

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