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抗原修复锅的这些注意事项要牢记

 发布时间:2019-02-20 点击量:1657
   抗原修复锅的这些注意事项要牢记
  抗原修复锅看上去像我们烹饪的高压锅,这是一款功能*的“高压锅”,主要用于抗原暴露的工作,主要的工作原理也是装玻片的几个分室可以达到高温(>120°C)高压。灵敏的传感控制器来保持一定的温度和压力及一定的时间,这些工作参数都是经过严格的科学实验得到的数据。当达到需要的温度,抗原修复锅会在该温度下保持几分钟,之后锅内玻片被冷却2个多小时,特殊设材质的内锅体控制了锅和玻片的冷却速度。
  抗原修复锅的注意事项:
  1、PH值的应用范围及选择。
  应用于抗原修复的物质很多,但至今为止,大家觉得的较好的抗原修复液还是柠檬酸盐缓冲液PH6.0,据多年来的实践认为,该液确实很好,它适合于大多数的抗原,在常规应用的临床标记抗体中基本都适用,经用该液修复后的抗原表达增强,抗原的定性和定位很理想,结果不错。
  2.抗原修复时应选择温度。
  70℃-90℃的温度对没有经固定的蛋白可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白,要使其发生变性,温度必须在92℃↑。据实验认为温度在92℃-98℃是合适的,尤其在95℃为较好,这是因为:①这种温度未达沸腾,切片不容易脱离裁片;②能够解离和破坏与蛋白交联的甲醛醛键等,处理时可以随意选择和确定抗原修复锅的抗原修复作用时间。
  3.抗原修复锅工作时有效温度所需持续时间根据各单位的设备条件以及使用的仪器不同,抗原修复时在有效的温度范围内所持续的时间也不一样。例如:真空负压抗原修复法,当达到预定的温度和所需的负压(66.7KPa)后可持续5-10分钟,微波辐射抗原修复法温度不好控制,抗原修复液容易沸腾,如果切片附贴任凭其沸腾持续5-10分钟。如果切片附贴很牢固,为了防止脱片,一发现抗原液已沸腾,即可关掉电源,待温度下降后,又可重开电源。如此反复数次,使之持续10分钟。不过似这种停停开开着的做法效果不如开着的,因为开着的除了热效应以外,还有足量的微波辐射。应用高压抗原修复法,当发现抗原修复液沸腾后,加上压力阀,出现喷气后,可持续时间达2-4分钟。隔水热加热抗原修复法,要特别注意内外液体的温度,内液指抗原修复液,外指浸泡抗原修复液容器的水,应用时用温度计浸入抗原修复液测试,使之保持在有效的温度(92℃↑)范围内。持续时间在40分钟,电炉加热抗原修复法,其持续时间在10分钟以上。由于效果较差,该法目前较少使用。
  4.抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的。
  抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,决不能为了争取时间,强行用冰块或冷水令其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其它的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。如果用冰块和冷水强行令其降温,松开后的蛋白分子肽链突遇降温而固定下来,恢复不了原有的构型,抗原修复锅就达不到预想的效果。

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